产品目录

本制品可配制50块Tricine-PAGE胶(8×10cm，厚度为1mm)，适用于2～5kDa蛋白的Tricine体系电泳。

• 操作便捷：制胶无需计算所需溶液量，无需稀释；
  
• 彩色上层胶：为上样提供便利；
  
• 适用范围广：凝胶不含SDS，也可用于非变性电泳；
  
• 高分辨率：可以有效分离2～5kDa多肽；
  
• 避免异味：无需使用TEMED，避免恶臭气味；
  
• 方便电泳：本制品需配套10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液使用，无需区分阳极缓冲液和阴极缓冲液。

本试剂盒提供的改良型促凝剂具有更好的稳定性和催化效能，为方便操作，已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少三个月。

• 本制品制备出的凝胶其上层胶对样品没有浓缩效应，与预制胶类似，但与传统PAGE胶相比，对蛋白条带分离效果更好。
  
• 不同浓度试剂盒配胶组分请勿混用，否则会影响制胶及电泳效果。
  
• 改良型促凝剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整。加入较多量的促凝剂可加速凝胶，反之亦然。
  
• 凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下，温度越高，凝胶速度越快，室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量；相反，如果室温较低，可适当延长凝胶时间。
  
• 在配胶之前，使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟)，可有效避免凝胶中气泡的形成。
  
• 考马斯亮蓝快速染液(免脱色)含挥发性物质，请注意密封以避免失效。

• 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.0/2.7mL，混匀。
  
• 向步骤1的混合溶液中加入40/60μL的改良型促凝剂，混匀。
  
• 将步骤2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可(此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于配胶杯中，以判断胶凝固状况)，加入适量水或醇(如异丙醇、正丁醇等)覆盖于下层胶之上。
  
• 待下层胶凝固后(约15min)，倒去上层水或醇。
  
  当水(醇)和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固。
  
  
• 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.5/0.75mL，混匀。
  
  由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。
  
  
• 向步骤5的混合溶液中加入10/15μL的改良型促凝剂，混匀。
  
• 将步骤6的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿。
  
• 待上层胶凝固后(约15min)，拔去梳齿即可用于电泳。

• 将适量10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液稀释成1×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液；
  
• 将样品与2×Tricine变性蛋白上样缓冲液(还原型)等体积混匀，95℃加热5～10min，加热结束后，高速离心5min，上清即可用于电泳分析；
  
  蛋白Marker需根据相应说明书进行操作。
• 向电泳槽的内槽注满1×Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液，外槽注入适量1×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液，轻轻拔出梳齿，用移液器将梳孔吹洗干净，将处理后的蛋白样品或Marker加入点样孔，按以下推荐条件进行恒压电泳即可。
  10% Tricine胶，120 V，1h；
  16% Tricine胶，120 V，2h。
  
  电泳结束后，应尽快进行后续步骤，防止多肽扩散出凝胶外。

• 因多肽在凝胶中易发生扩散，建议将电泳后的Tricine胶在异丙醇固定液(50%异丙醇，10%乙酸，40%纯水)中固定30min后，再进行染色；
  
• 弃去异丙醇固定液，加入适量免脱色考马斯亮蓝快速染液，以覆盖凝胶为宜，室温下于水平摇床上染色10～15min。如蛋白量较低，可适当延长染色时间，实际染色时间可根据条带显现程度决定。染色结束后，弃去染色液，加入纯水洗涤去除残留染液，即可观察结果。